将已知抗原(精子)与第一抗体(待检血清)结合后,再与经异硫氰酸荧光素(FITC)标记的第二抗体结合后,在荧光显微镜下,可见绿色荧光,从而判断患者血清中是否存在抗精子抗体。
【试剂】
(1)0.01mol/L pH 7.4 磷酸缓冲液(PBS)。
(2)甲醇(分析纯)。
(3)羊抗人 IgG-FITC。
【方法】
(1)取正常男性*,自然液化。
(2)PBS离心洗涤 3次,去除精浆,调精子浓度为 5×104/mL。
(3)精子悬液涂片,室温自然干燥。
(4)甲醇固定 10min。
(5)滴加待检血清、阳性血清、阴性血清(处女 AB 型血清),37℃ 湿盒30min。
(6)PBS洗 3次,每次浸洗 3min。
(7)滴加羊抗人 IgG-FITC,37℃ 湿盒 30min。
(8)PBS洗 3次后,荧光镜下观察结果。
【结果】
荧光镜下观察,精子头部、中段出现荧光为抗精子抗体阳性